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从零开始手把手教你养细胞
来源：未知 作者：seagull8111 点击:次 时间：2013-03-10
如果你是医学生,如果你正在或者将要读研,就意味着你将有一段枯燥乏味的时间会在实验室度过,在开始之前肯定会像我当时一样迷茫、无助、不知所措，为了让你在进入实验室时不至于产生跳楼的冲动，我仅浅谈一下自己摸索的过程，希望对你有帮助，先声明下，本人也是菜鸟，大家共同学习，有问题欢迎指出，谢谢
准备阶段
准备阶段是比较重要也是比较花费时间的，培养细胞用的基本的东西包括培养瓶、玻璃瓶（100ml用来分装培养基、250ml用来分装PBS缓冲液、10ml用来分装血清）、培养皿 手术器械 烧杯 离心管 0.25%胰蛋白酶（用来取原代细胞） 酒精灯、大镊子、胶塞（00号、1号的都要）、培养基、血清、移液管及胶皮头、牛皮纸、尼龙绳、锡铂纸 、棉花、饭盒（用来装东西）、刷子
当你的所有东西都准备好了后，还不能开始养细胞 ，这些东西还需要经过一系列复杂的程序才能用
玻璃制品：需要用洗洁净刷洗最少五遍，然后烘干，然后用网兜或者其他的装好泡酸过夜 ，第二天拿出来用清水冲洗最少十遍，然后再用蒸溜水泡半小时，冲三遍，放入饭盒后移入烤箱烘干或者直接高压，取出后放好即可用了
胶塞等朔料制品：同样用洗洁净刷洗后烘干，放入NaOH中煮二十分钟 ，自来水冲洗后用蒸溜水泡后再冲洗 ，放入饭盒内烘干，然后高压 ，取出标记后放好待用
当所有这些基本的东西都准备好了，下一步就是取材开始原代培养，当然如果你是要接种细胞就直接养吧;由于我刚把成纤维细胞养出来，所以就以它为例说说。
动物的来源就不多说了，像我们这种平民只买的起老鼠了，那也要10元一只，还是刚出生的乳鼠。
无论是什么时候操作都是在超净台内完成的，使用之前需要用紫外线灯照半小时，后用酒精擦拭台面，尽量使超净台内是无菌的，把买来的新生一天的大鼠乳鼠断颈处死后放入酒精内泡一分钟，转入超净台内的培养皿内，先后用碘酒、酒精擦拭小鼠背部皮肤，用PBS冲洗后移入另一培养皿，取出眼科镊子和弯剪子，分离小鼠背部皮肤，再转入另一培养皿内用PBS冲洗至皮肤发白，用手术刀刮除真皮下组织，翻过来刮除表皮，仅留下真皮层（感觉差不多就行，看不见，呵呵），转入另一培养皿用PBS冲洗干净，到此取材算是结束。
组织块培养法：
将所取的材料用直剪刀或者刀片弄成1mm*1mm左右的小块，用加有10%胎牛血清的DMEM低糖培养基浸泡后用移液管移入培养瓶内，使其分散均匀，间隔3-5mm左右，再把里面的培养液吸出仅保留一小部分，盖上盖子，翻过来放入温箱内一个小时，取出来加入适量培养液翻正培养，定期观察......换液......传代......
酶消化法：
将所取的材料移入小的玻璃瓶，用直眼科剪乱剪，越碎越好，加入少量PBS后全部移入离心管内，后加入10倍体积的0.25%胰蛋白酶，摇匀，移入37度水浴锅内消化二十分钟，边消化边震荡，后移入超净台内加入适量培养液终止消化，吹打混匀后离心，1500转/分钟、10分钟，弃去上液，加入适量PBS冲洗后离心1000转/分钟、5分钟，弃去上液，同样方法消化一遍，终止消化后离心获得细胞和组织块混合固体，加入培养液适量吹成悬液，取出滤器，放入培养皿内，用培养液湿润中间一小部分滤过膜，移液管吸取悬液吹过滤膜，收集过滤后的悬液，离心，计数后按10^5个/ml接种于培养瓶内培养，定期观察......换液......传代......
准备阶段
准备阶段是比较重要也是比较花费时间的，培养细胞用的基本的东西包括培养瓶、玻璃瓶（100ml用来分装培养基、250ml用来分装PBS缓冲液、10ml用来分装血清）、培养皿 手术器械 烧杯 离心管 0.25%胰蛋白酶（用来取原代细胞） 酒精灯、大镊子、胶塞（00号、1号的都要）、培养基、血清、移液管及胶皮头、牛皮纸、尼龙绳、锡铂纸 、棉花、饭盒（用来装东西）、刷子
当你的所有东西都准备好了后，还不能开始养细胞 ，这些东西还需要经过一系列复杂的程序才能用
玻璃制品：需要用洗洁净刷洗最少五遍，然后烘干，然后用网兜或者其他的装好泡酸过夜 ，第二天拿出来用清水冲洗最少十遍，然后再用蒸溜水泡半小时，冲三遍，放入饭盒后移入烤箱烘干或者直接高压，取出后放好即可用了
胶塞等朔料制品：同样用洗洁净刷洗后烘干，放入NaOH中煮二十分钟 ，自来水冲洗后用蒸溜水泡后再冲洗 ，放入饭盒内烘干，然后高压 ，取出标记后放好待用
当所有这些基本的东西都准备好了，下一步就是取材开始原代培养，当然如果你是要接种细胞就直接养吧;由于我刚把成纤维细胞养出来，所以就以它为例说说。
动物的来源就不多说了，像我们这种平民只买的起老鼠了，那也要10元一只，还是刚出生的乳鼠。
无论是什么时候操作都是在超净台内完成的，使用之前需要用紫外线灯照半小时，后用酒精擦拭台面，尽量使超净台内是无菌的，把买来的新生一天的大鼠乳鼠断颈处死后放入酒精内泡一分钟，转入超净台内的培养皿内，先后用碘酒、酒精擦拭小鼠背部皮肤，用PBS冲洗后移入另一培养皿，取出眼科镊子和弯剪子，分离小鼠背部皮肤，再转入另一培养皿内用PBS冲洗至皮肤发白，用手术刀刮除真皮下组织，翻过来刮除表皮，仅留下真皮层（感觉差不多就行，看不见，呵呵），转入另一培养皿用PBS冲洗干净，到此取材算是结束。
组织块培养法：
将所取的材料用直剪刀或者刀片弄成1mm*1mm左右的小块，用加有10%胎牛血清的DMEM低糖培养基浸泡后用移液管移入培养瓶内，使其分散均匀，间隔3-5mm左右，再把里面的培养液吸出仅保留一小部分，盖上盖子，翻过来放入温箱内一个小时，取出来加入适量培养液翻正培养，定期观察......换液......传代......
酶消化法：
将所取的材料移入小的玻璃瓶，用直眼科剪乱剪，越碎越好，加入少量PBS后全部移入离心管内，后加入10倍体积的0.25%胰蛋白酶，摇匀，移入37度水浴锅内消化二十分钟，边消化边震荡，后移入超净台内加入适量培养液终止消化，吹打混匀后离心，1500转/分钟、10分钟，弃去上液，加入适量PBS冲洗后离心1000转/分钟、5分钟，弃去上液，同样方法消化一遍，终止消化后离心获得细胞和组织块混合固体，加入培养液适量吹成悬液，取出滤器，放入培养皿内，用培养液湿润中间一小部分滤过膜，移液管吸取悬液吹过滤膜，收集过滤后的悬液，离心，计数后按10^5个/ml接种于培养瓶内培养，定期观察......换液......传代......