医学检验超浓缩笔记本(3)

含氮类（多溶于水），类固醇类（要特殊蛋白结合）。主要受：下丘脑---垂体—内分泌腺—激素系统调节。一般用EDTA抗凝。Graves病：甲状腺性甲亢，TT3是它早期疗效观察及停药后复发的敏感指标，TRH试验中TSH不升高，TSAB阳性达80%--100%。甲减时严重可出现黏液水肿。目前认为联合进行FT3，FT4，和超TSH测定是甲状腺功能评估的首选方案和第一指标。TT4是判定甲状腺功能最基本的筛选试验。TSH不受TBG浓度影响，是反应下丘脑—垂体—甲状腺轴功能的敏感试验，尤其是对亚临床型甲亢和亚临床型甲减的诊断。肾上腺髓质（嗜铬细胞瘤最好发部位）是节后神经元转化为内分泌细胞（嗜铬细胞），能合成，释放肾上腺素（E），去甲肾上腺素（NE），多巴胺（DA），结构上均为儿茶酚胺类，血液及尿中的肾上腺素几全为肾上腺髓质分泌，尿香草扁桃酸（VMA）是儿茶酚胺的代谢产物测定时芬氟拉明可致假阴性。胰升糖素激发试验禁用于糖尿病人。肾上腺皮质分（由外向内）：球状带（盐皮质激素---醛固酮），束状带（糖皮质激素---皮质醇及少量皮质酮，是机体应激反应时的主要激素），网状带（雄激素和少量雌激素）。皮质醇增多最多见是垂体促肾上腺皮质激素（ACTH,呈脉冲式分泌，上午8时至10时最高，夜为上午的二分之一）分泌亢进引起的库欣病。库欣综合症的病理特点：脂肪代谢障碍（面部和躯干部脂肪堆积，向心性肥胖），蛋白质代谢障碍（处氮负平衡，蛋白消耗过多），糖异生加强，电解质紊乱。原发性肾上腺皮质功能减退（Addison病）：醛固醇（人体主要的储盐激素）缺乏，糖异生减弱，肾排水减弱，出现皮肤色素沉着。尿17—羟皮质类固醇（17—OHCS）：多用传统的Porter—Silber法测，男11—33，女8—25，用浓盐酸防腐。尿17—酮类固醇（17—KS）：男34—69，女17—52，采用Zimmerman法测。当肾上腺癌或不伴库欣综合症时KS比OHCS增高更高，而肾上腺瘤却倾向于降低或正常。血游离皮质醇和尿游离皮质醇呈正相关，是检查肾上腺皮质功能紊乱的首选项目。肾素由肾小球旁器分泌，是人体最强的升压物质也是让肾上腺释放醛固醇的主要刺激物。垂体激素均为多肽或糖蛋白，TSH，LH，FSH均由A，B两个多肽亚基组成。生长激素（缺乏得垂体性侏儒症，GH）的促生长作用必须通过生长调节素（SM）的介导作用。SM-C及SM结合蛋白测定因其不跟GH的分泌而波动，故单次即可了解GH功能状况。催乳素瘤是功能性垂体腺瘤中最常见的，好发于女性。所有性激素都是类固醇。睾酮代谢物为雄酮是17—KS的主要来源，雌二醇（生物活性最强的天然雌激素，女性早熟指标））和雌酮代谢物是雌三醇，孕酮（确证排卵）代谢物是孕烷二醇（黄体功能指标）。测定早晨的睾酮（男青春期10—20，成年期：300—1000）水平可以对男性睾酮水平下降作出最好评价。GNRH兴奋试验主要检测腺垂体促性腺的贮备功能状况。可以引起性功能紊乱的性激素合成酶有：C—17，20裂链酶，17—B羟类固醇脱氢酶，5A—还原酶。尿游离皮质醇无昼夜变化故可靠反映游离皮质醇水平。内标法只适用于双通道型原子吸收分光光度计。聚丙烯酰胺电泳普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼脂糖电泳适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸。等电聚焦电泳适合分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组份，分辨率最好。离心力（FC）=M（质量）ω（角度）2X（离轴心距离），相对离心力（RCF）=1.118*10-5*N(转数)*X。密度梯度离心法：1速率区带离心法：离心后近轴处密度小，一般用于分离大小相异而密度相同的物质。2等密度区带离心法：当管底介质的密度大于粒子的密度时，粒子上浮，用于分离大小相似而密度差异大。凝胶层析常用的是SephadexG系列主要用于脱盐分离提纯高分子物质。离子交换层析主要用于分离氨基酸多肽蛋白质也可是核酸等。亲和层析可用于纯化生物大分子，稀释液的浓缩不稳定蛋白的贮藏分离核酸。聚焦层析常用凝胶是Monop多元缓冲交换剂是PBE。K值过高线性宽但重复性差，过低精密度好但线性差。酶偶联法已是是广泛最频繁的酶测定法，主要用30和37，它有明显的延滞期，最好条件是酶反应为限速度，动力学上为零级反应而指示酶是一级反应。Q10值即温度增加10度化学速度的变化率，约在1.5—2.5。
免疫学：
免疫防御（对外）免疫自稳（防自身免疫病）免疫监视（防肿瘤）。标记免疫技术应用最多，自动化是免疫学检验发展趋势。抗原的表位至少有二种方式：顺序或线性表位，三维结构的构象表位。天然抗原绝大多数是胸腺依赖性抗原（TD—AG）。超抗原被T细胞识别时虽然要与MCHII类分子结合，但不受II类分子的限制，可以直接活化T细胞而且效率高。抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL是抗原结合部位，CL，CH1是遗传标记所在，CH2有补体结合点，CH5能固定组织细胞，CH3和CH4还参加I型变态反应。免疫学中常用木瓜和胃蛋白酶。免疫球蛋白的血清型有：同种型（正常个体都有）同种异型（只存在同种的某些个体中）独特型（某一个体独有的。独特性网络在免疫应答的调控中起重要作用）。天然IgG分子无活性。IgM（五聚体，天然凝集素和冷凝集素，是B细胞膜上主要表面膜Ig）激活补体能力最强，IgG（单体，电泳最慢，再次免疫应答的主要抗体）至少要两分子。0.1m,2巯基乙醇能破坏IgM但不破坏IgG,可以区分它们。母乳中的分泌型IGA提高了婴儿出生后4—6个月内的局部免疫屏障，常称为局部抗体。人类重链基因位于14号染色体上，K基因位于第二号染色体上。参与补体激活经典途径的固有成份按先后为C1，C2。。。。C9，C1由C1q,C1r,C1s,三种组成。灭活的补体在片在符号前加i，有酶活性的上加一横。补体大多是糖蛋白多属B球蛋白，C1q，C8是r蛋白。C1s，C9是a球蛋白。C3含量最多，C2含量最少。替代途经的激活物主要是细胞壁成分。补体清除免疫复合物的方式：吞噬调理，免疫粘附，免疫复合物抑制。编码人C4，C2，B因子的基因在第六染色体短臂上与MHC的基因相邻，命名为III类组织相容性基因。产生补体主要是肝脏主要是巨噬细胞。已发现的归巢受体有：CD44，LFA-1，VLA-4，MEL-14/LAM-1等。CD2表达于全部T细胞和NK细胞。CD3表达在全部T细胞，CD4（辅助性T细胞）/CD8（细胞毒性T细胞）相互关联但意义不同是T细胞亚群的表面标志。SIG的功能是作为B细胞表面的抗原受体可与相应抗原特异性结合并将抗原内摄处理。MHCII是辅佐细胞（AC）递呈抗原的必须物质是辅佐细胞（有单核吞噬，树突状，B细胞）的标志。明确的白介素有15个，IL-2主要由T细胞（CD+4）受抗原或丝裂原刺激后产生，15KD，113糖蛋白。II型干扰素又称免疫干扰素或IFNR，主要由T细胞产生。肿瘤坏死因子：TNEa：由细菌脂多糖活化的单核细胞产生引起出血坏死也称恶病质素，TNFb：由抗原或丝裂原刺激的淋巴细胞产生有肿瘤杀伤和免疫调节功能又称淋巴毒素。红细胞生成素（EPO）是糖蛋白，30—39KD，主要由肾小管内皮细胞合成也可由肝和巨噬细胞产生。人类MHC称为HLA复合体，位于第六对染色体的短臂上。其多态性为复等位基因所致，当群体中位于同一位点的等位基因多于两种时为复等位基因，HLA的遗传特点：单倍型，共显性，连锁不平衡。I和II类MHC分子是引起同种异体移植排斥反应的主要抗原。当抗原递呈细胞向免疫活性细胞递呈抗原时，免疫活性细胞在识别特异性抗原时，必须识别递呈细胞的MHC抗原称为MHC限定性。HLA是体内最复杂的多态性基因系统。抗原—MHCII类分子复合物与T细胞受体的结合是使TH细胞活化的首要信号。细胞免疫的效应方式有：细胞毒，迟发超敏。体液免疫以血清中有循环抗体为特征。炎症细胞有：中性，肥大，嗜酸，嗜碱，血小板，内皮。炎症介质：血管和平滑肌收缩介质，趋化因子，酶类，蛋白多糖。免疫炎症类型：IGE介导，免疫复合物，细胞，皮肤嗜碱细胞型。抗原抗体结合基于结构互补与亲和性。由一级结构决定。结合力有：电荷吸引，范德华力，氢键，疏水性作用力。常用佐剂有：氢氧化铝，明矾（弗氏）是目前动物免疫中最常用的，抗血清保存：4度，低温，冰冻干燥。抗体特异性纯化有：亲和层析，吸附法。特异性鉴定有：效价，特异性，纯度，亲和力。脾淋巴细胞特征是抗体分泌功能和能在选择培养基中生长，骨髓瘤细胞则可无限分裂既永生性。细胞融合的选择培养基有三成份：次黄嘌呤（H）氨甲蝶呤（A）胸腺嘧啶核苷（T）称为HAT培养基。液体沉淀试验有：抗原稀释法和抗体稀释法及方阵滴定法。免疫固定电流常用于M蛋白的鉴定。补体结合试验中5种成份分三个系统（反应，补体，指示）不溶血为阳性。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（底物为邻苯二胺，四甲基联苯胺）碱性磷酸酶（底物为磷酸酯）。抗体制备常用二醛法及过碘酸盐法。RIA（放免）核素标记抗原，竞争抑制，2-3个数量级，标记物限量。IRMA（免疫放射）核素标记抗体，非竞争结合，3个数量级以上，标记物过量。常用的荧光素有：异硫氰酸（FITC）四乙基罗丹明（RB200）四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）。常用标记蛋白的方法有：搅拌法和透析法。荧光抗体鉴定包括效价及荧光素与蛋白的结合率，大于1：16为理想，一般固定标本的荧光抗体以F/P=1。5为宜用于活细胞染色的以2。4为宜。时间分辨荧光免疫测定以镧系元素铕合物为荧光标记物，偏振免疫测定的偏振波长是485（蓝光）。发光免疫技术：生物发光有荧火虫荧光素，化学发光底物有：氨基苯二酰肼类主要为鲁米诺及异鲁米诺衍生物，哑啶酯类，电化学发光底物为三联吡钌另一类为三丙胺。胶体金颗粒由一个基础金核及包围在外的双离子层构成，其性质有对电解质敏感性，呈色性，光吸收性（510—550）。双抗体夹心法的质控点最好是相应抗原。外周单个核细胞的分离的分层液常用：Ficoll（由上到下为血浆，单个核细胞，粒，红）和Percoll（由上至下：死细胞，单个核细胞，淋，红，粒）。纯淋巴细胞群的采集有：黏附贴壁法，吸附柱过滤法，磁铁吸引法。亚型的分离法有：E花环沉降法，尼龙分离法，亲和板结合法，荧光激活细胞分离仪法。淋巴细胞活力测定常用台盼蓝染色法，死为蓝色。保存时二甲亚砚为保护剂。植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法（分别计数淋母，过渡性淋母，核有丝分裂相及成熟小淋，前三者为转化细胞，计200个，算转化率）核素法。SMfg是鉴定B细胞可靠的指标。B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（直接法只能检测IgM生成细胞，其它用间接法，即在脾细胞和SRBC混合时加入抗Ig抗体。B细胞增殖能力试验。测定人NK细胞活性多用以K562细胞株为靶细胞，测鼠NK细胞活性则用YAG细胞株。嗜酸粒细胞活化产物的测定：产物有：阳离子蛋白（ECP），主要碱基蛋白（MBP），X，EPD，EDN等，其中ECP毒性最强因而认为是嗜酸的特异性标志。特异性鼻粘膜激发试验用变应原非特异性采用乙酰甲胆碱或组胺。新月体性肾小球肾炎的免疫病理类型有：免疫复合物，抗肾小球基底膜（GBM）抗体，抗中性白细胞质抗体。含有新月体的肾小球数目和比例是该病的关键。膜性增生性肾小球肾炎（MPGN）是原发性肾小球病中唯一具有独特的血清补体异常的疾病测C3NeF。自身免疫病（AID）的特征：高滴度自身抗体，病理特点为免疫炎症损伤与抗原分布一致，能建动物模型。不溶性DNP（抗核蛋白抗体）通常完全被DNA和组蛋白吸收，是形成狼疮细胞的因子。抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性。抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一。ANA阳性的荧光现象分：周边型表示抗DNA抗体存在（SLE），均质型表示有抗核蛋白抗原（DNP）抗体，斑点型多为抗ENA抗体（结缔组织病），核仁型多为抗核小体抗体（硬皮病）。抗乙酰胆碱受体抗体的检测对重症肌无力（MG）具有诊断意义。Hep—2细胞（人喉癌上皮细胞株）,Hela细胞（宫颈癌细胞株）,Farr法测定dsDNA抗体的特异性高为公认标准法，当抗dsDNA抗体结合率大于20%时对SLE有意义。口干症和干燥性角膜炎是干燥综合症（SS）的主要临床表现。多发性骨髓瘤（最常见免疫增殖病）以IGG居多，重链病类别常见R，A，U三型。原发性B细胞缺陷病：全IG缺失（BROTON病，女带，男患病，最先考虑测IG浓度，CD分子，SMIG），部分缺失，IG正常但无抗原反应。原发性T细胞缺陷病：易发生GVHR。原发性联合免疫缺陷病，以重症联合免疫缺陷（SCID）的预后最差，属性联或常染色体隐性遗传，T细胞表面存在特异性CD抗原，通过特异性单克隆抗体检测是诊断细胞免疫最有价值的试验。补体缺陷发病率最低。性联慢性肉芽肿（CGD）是性联遗传，女带男患病，特点是吞噬细胞不能产生超氧化物酶杀菌，白细胞低于1500时应考虑，可作四唑氮蓝（NTB）还原试验，REBUCK皮肤窗检测。只有感染了乙肝才肢感染丁肝。艾滋病T淋巴细胞亚群检查可发现T细胞绝对数下降，CD4+淋巴细胞也下降，CD4/CD8小于1。抗体主要是P24，GP120。CEA大于60微克/升时可见于结肠，胃，肺癌。手术6周后CEA水平正常。血清CEA结合甲状腺降钙素测定有助于甲状腺髓样癌的诊断和估计。AFP是原发性肝癌的最灵敏最特异的标志。胰胚胎抗原（POA），糖类抗原有：CA125（上皮性卵巢癌（基因有K-RAS）和子宫内膜癌）CA15-3（乳腺癌，基因有P53，C-ERB-2））CA19-9(胰腺，结直肠癌)CA50（胰腺结直肠癌）AFU（A—L岩藻糖苷酶）是原发性肝癌的新指标。神经元特异性烯醇化酶（NSE）是神经母细胞瘤和小细胞肺癌（基因有P53，RB）的标志物。HLA-A，B，C，DR，DQ位点的抗原可用血清学方法进行检测，所以称为SD抗原，采用补体依赖的细胞毒（CDC）试验，HLA—D，DP位点的抗原须用细胞分型进行鉴定，称为LD抗原，采用混合淋巴细胞培养（MLC）。排斥反应有：宿主抗移植反应（HVGR）和移植物抗宿主反应（GVHR）。