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分子生物学检验


来源:      作者:      点击:次      时间:2007-03-20
(一)荧光定量PCR技术简介:实时荧光定量PCR技术使PCR实现了从定性到定量的革命性飞跃,它在临床检测中应用范围之广,解决问题之深入,都是前所未有的,因此有极高的实用价值,显示出光明的应用前景,目前在临床上可用于:(1)早期诊断:免疫学诊断主要是抗原抗体反应,应用于临床通常是在体内产生抗体以后,许多病原体的抗体产生存在较长的"窗口期";而PCR方法直接检测病原体的DNA/RNA,能大大缩短"窗口期", 显然有利于疾病的早期诊断。(2)药物疗效观察:对病原体的药物治疗中,免疫学指标的变化通常比较滞后出现,且受个体差异影响较大,从而对临床判断难以及时提供直接证据,而荧光定量PCR检测可直接反映病原体滴度是否受药物治疗发生变化,从而为药物疗效观察提供直接证据,以供临床治疗参考;同时药物治疗中可能引起的基因变异等情况更依赖核酸检测提供直接证据。(3)病情判断和预后评价:评估受侵器官或组织的炎症发生程度以及是否发生病变;长时间机体病毒高水平的患者尤其是慢性病患者往往预后不好。因此对病原体的定量PCR检测对病情和预后评估均有参考意义。(4)加快疾病的诊断:许多病原体到目前为止仍然依*传统的细菌培养作为诊断手段,培养时间较长。以结核杆菌为例,传统培养法需要1-2个月,而荧光定量PCR可将检测时间缩短至半天,能更及时地为临床提供诊断依据。(5)疾病的发病监控:许多病原体感染人体后可以整合入细胞内成为整合型,一旦机体免疫力下降等又重新进入活动期并引致发病,临床上希望通过检测病原体基因的数量变化并结合临床表现找出其活动以及是否引起发病的规律,荧光定量PCR可以为此提供直接证据。(6)遗传疾病的诊断:荧光定量PCR可实现对点突变、缺失突变、插入突变、多基因突变等遗传病的检测。对产前诊断具有其他方法不可比拟的优势,有利于指导优生优育,提高人口素质。(7)母婴传播的监控:荧光定量PCR技术可对病原体的母婴传播进行有效的监控,为阻断病原体的母婴传播提供参考。(8)献血员的筛选:荧光定量PCR检测的高灵敏度在对"窗口期"的缩短、提高输血安全方面有重要作用,目前美国、日本以及欧洲均已采用PCR对鲜血员进行筛选。9)肿瘤的诊断:荧光定量PCR可对原癌基因的突变和易位等作出检测;对原癌基因mRNA进行定量分析;有利于肿瘤的早期诊断,甚至癌前诊断;为探索癌变发生机理的研究提供参考;区别肿瘤的良性和恶性以及炎症反应。
(二)荧光定量PCR检验(采集血液或其它分泌物标本,放入一次性无菌密闭容器送检,血液标本不要求空腹)
检验项目 参考值: 临床意义:
乙肝病毒(HBV-DNA) 
参考值:<103拷贝/mL 
临床意义:
增高:提示病毒正在复制,并具传染性;是反映乙肝病毒复制状况及传染性的最佳指标,可用于观察药物疗效,指导用药。

丙肝病毒(HCV-RNA) 
参考值:<103拷贝/mL 
临床意义:
增高:提示病毒正在复制,为丙肝感染的确切标志。能缩短丙肝病毒感染检测的窗口期;可提高免疫功能低下及经免疫抑制治疗者的检出率;用于观察药物疗效,指导用药。

淋球菌(NG-DNA) 
参考值:<103拷贝/mL 
临床意义:
增高:提示淋菌感染。有利于早期、无症状诊断;并可用于病程跟踪,指导治疗。

沙眼衣原体(CT-DNA) 
参考值:<103拷贝/mL 
临床意义:
增高:提示沙眼衣原体感染。有利于早期、无症状诊断;并可用于病程跟踪,指导治疗。

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