微生物检验

（一）血液与无菌部位体液的微生物检验
1、一般原则：标本一般情况下应在病人发热初期、发热前2小时或发热的高峰期时采集。原则上应选择在抗菌药物应用之前。对已用药而病情不允许停药的病人也应该在下次用药前采集。细菌培养阳性率与采样的频率和部位有一定的关系，增加采样的频率、多部位采样会提高培养阳性率,至少应连续三次培养。
2、标本采集：
（1）标本量：5-10ml
（2）采集前：a.血培养瓶应在使用前平衡至室温b.使用前应仔细检查瓶内是否混浊、瓶内压力是否过大，如果出现这两种情况之一，则表明血培养瓶可能被污染；c.因关节液、胸腹水等在炎症时蛋白含量高，易形成凝块，建议用无菌肝素抗凝采集。
（3）采集时：a.掀开瓶上塑料易拉盖用75%的酒精消毒，等一分钟；b.严格做好患者采样部位的无菌操作；
（4）采集后：注入标本的血培养瓶应后应迅速轻摇，充分混匀，立即送检，如果因某种原因不能及时送检时应将已接种标本的培养瓶放置室温，切勿放在冰箱中。脑脊液应在15分钟内送检。
（5）无菌部位体液亦可用无菌程序收集3-5ml于无菌容器中。脑脊液15分钟内送检，注意保温；胸腹水、关节液、心包液等在原则上应在用药前采集或在停药2日后进行，并应盛于有抗凝剂的无菌容器内，立即送检或置于4oC保存。如为淋菌培养采集后应立即送检或床边接种。
3、评价与建议
（1）我科提供的SIGNAL血培养瓶可供血液及其它无菌部位体液培养使用，送检48小时后报告检验结果，如为阴性继续培养至一周。
（2）血培养阳性率与抽血时间、治疗与否密切相关，必要时取骨髓培养。对于培养阴性者应结合临床资料，不可轻易做出无菌判断。
（3）对检出细菌肯定为血中病原菌的标准是：a.两次血培养均为同一菌；b.患者2-3周后血中抗体滴度明显升高，应做败血症病原菌处理。
（4）两种以上细菌感染或细菌真菌同时交替感染的败血症也有可能出现，但其中一种为主要致病菌。
（5）伤寒：根据病程和病情可在不同时间采集不同的标本，在病程的第1-2周内采集静脉血或在1-3周内采集骨髓培养为最佳。
（6）亚急性心内膜炎：除在发热期采血外应多次多部位采血，第一天作三次血培养，每次间隔一小时以上。如果24小时培养阴性，应继续抽血三次(仍是间隔一小时以上)或更多次进行培养；已用抗生素治疗患者应在48小时内取6份标本，每次于用药前采集，或停药后2-7天后采血培养。
（7）急性心内膜炎：治疗前3小时内分别在3个不同部位取三份标本分别进行培养。
（8）急性败血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎、急性末处理的细菌性肺炎和肾盂肾炎除在发热期采血外，还应在治疗前10分钟内在不同部位采血培养。
（9）不明原因发热可于发热周期内多次采血作培养，每次间隔60分钟。如果24小时培养为阴性，应继续采血2-3份（每次间隔30分钟以上）或更多血标本培养。
（10）作脑脊液培养时，建议同时作血培养。
（11）胸腹水、穿刺液等培养时建议加做直接涂片检查。
（二）尿液标本的微生物检验
1、一般原则：尿液标本采集与培养最大的问题是污染杂菌，故应严格无菌操作。原则上应在抗菌药应用之前或停用5天后留取标本，通常采集晨起第一次尿液。
2、标本采集
（1）标本量：5-10ml
（2）采集前：a.清洁排尿法：女患者将yinchun分开，用肥皂水或碘伏清洗外阴，然后用清水冲洗尿道口周围、擦干；男患者应翻转包皮、清水冲洗，用2%红汞或1：1000新洁尔灭消毒尿道口；婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口以橡皮膏贴于皮肤上留取尿液；b.膀胱穿刺法：穿刺时膀胱充盈，皮肤严格消毒后在耻骨上膀胱穿刺取尿；c.留置导尿管患者采集标本时用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。
（3）采集时：用无菌广口容器在不中断尿流的情况下收集中段尿。置导尿管的病人不可打开导尿管和引流管连接处收集尿液，也不可直接从引流袋留取标本。
（4）采集后：应在1小时内送检，超过2小时应重送，避免假阳性。
3、评价与建议
（1）泌尿系感染时可培养出细菌，革兰氏阳性菌菌落数大于5×104CFU/ml;革兰氏阴性菌菌落数大于1.0×105CFU/ml时，有诊断意义，但菌落数低于此标准不能完全排除尿路感染，多见于以下几种情况：a.应用抗菌素，尿中细菌受抑；b.病原菌发育要求高，尿中细菌在培养条件限制而繁殖受抑；c.尿频时，膀胱内细菌停留时间短而细菌数少；d.大量输液或使用利尿剂后，使尿液稀释；e.尿pH<5.0或>8.5，细菌发育受阻；f.留尿时外阴消毒剂混入尿中。
（2）培养结果与病例矛盾时，可用耻骨上穿刺膀胱取尿。
（3）确定菌尿是否来自肾脏可用导尿管取肾盂尿。
（三）呼吸道标本微生物检验
1、一般原则：呼吸道标本的微生物检验中应特别注意标本质量问题，通常要晨起收集标本，同时应将标本涂片、革兰氏染色一并检验，以利于标本质量评价。在真菌培养时最好同时做涂片染色和普通细菌培养。另外约有25%-50%的肺部感染者可伴有菌血症，建议同时做血培养。
2、标本采集
（1）标本量：痰、支气管肺泡灌洗液、支气管吸出物大于1ml；上呼吸道标本用拭子运送。
（2）采集前：a.自然咳痰法：要求患者清晨留取痰标本，留取前用清水漱口3次，用力咳出。咳痰困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出；幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方气管以诱发咳痰或用压舌板后压舌，用拭子伸入咽部。小儿以压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检；c.上呼吸道标本晨起后采集为宜，采集前患者应用清水反复漱口，将舌外伸，使腭垂尽可能向外牵引用拭子取材，将拭子通过舌根触到咽后壁或腭垂后侧，涂抹数次持续5秒以吸收分泌物，拭子要避免接触口腔和舌粘膜，后直接放入无菌容器。
（3）采集时：a.将深部的痰收集于无菌容器中；b.将支气管肺泡灌洗液后的吸出物或洗出物放入无菌容器中。
（4）采集后：标本20分钟内送检。真菌培养或结核菌检查的标本若不能及时送检，可放在4oC保存，但不能超过8小时。拭子应在2小时内送检。
3、评价与建议
（1）痰标本不合格往往造成病原菌诊断与实际引起感染的病原菌不符，以至抗菌药物应用不合理甚至导致出现耐药菌，应充分重视标本质量和及时送检。
（2）上呼吸道的正常菌群有：α、γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、及非致病性的奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌等。